Jakmile buňky, ve kterých kultivujeme

buněčná továrnajsou kontaminované, s většinou z nich se obtížně manipuluje.Pokud jsou kontaminované buňky cenné a je obtížné je znovu získat, lze k jejich odstranění použít následující metody.

1. Používejte antibiotika

Antibiotika jsou při ničení bakterií účinnějšíbuněčné továrny.Kombinovaná léčba je účinnější než samotná léčba.Preventivní medikace je účinnější než medikace po kontaminaci.Preventivní medikace obvykle používá dvojité antibiotikum (penicilin 100 u/ml plus streptomycin 100 μg/ml).Po kontaminaci musí být metoda čištění 5 až 10krát větší než obvyklé množství.Lék by měl být používán po dobu 24 až 48 hodin po přidání a poté by měl být nahrazen obvyklou rutinou.Kultivační tekutina.Tato metoda může být účinná v raných fázích kontaminace.Mezi používaná antibiotika lze kromě penicilinu a streptomycinu zařadit také gentamicin, kanamycin, polymyxin, tetracyklin, nystatin atd. Běžně se používá 400 až 800 μg/ml kanamycinu nebo 200 μg/ml tetracyklinu.Médium se mění každé 2 až 3 dny a předává se po 1 až 2 generace k léčbě.V posledních letech bylo hlášeno, že 4-fluor, 2-hydroxychinolin (Ciprofloxacin, Cip), derivát pleu-romutilinu (derivát Pleu-romutilinu, BM-Cyclin2: BM-1 a derivát tetracyklinu (BM-2)) Antibiotika jsou účinný při zabíjení mykoplazmat při použití samostatně nebo v kombinaci.Tato tři antibiotika jsou všechna připravena do 250X koncentrovaných roztoků v PBS a skladována při -20 °C pro pozdější použití.Koncentrace použití Cip je 10 μg/ml, BM-1 je 10 μg/ml a BM-2 je 5 μg/ml.Při použití nejprve odsajte kontaminované kultivační médium, přidejte kultivační médium RPMI1640 obsahující BM-1, poté kultivační médium odsajte po 3 dnech, přidejte kultivační médium RPMI1640 obsahující BM-2 a kultivujte 4 dny a tak dále 3 po sobě jdoucí dny. .kola, dokud se fluorescenční barvicí mikroskopií 33258 neprokáže, že mykoplazma byla eliminována, pak se přidá normální kultivační médium pro kultivaci a pasážování 3-4 krát.

2. Tepelná úprava

Inkubace kontaminované tkáňové kultury při 41 °C po dobu 18 hodin může zabít mykoplazma, ale má nepříznivé účinky na buňky.Před ošetřením by proto měl být proveden předběžný test, aby se prozkoumala doba zahřívání, která může v maximální míře zabít mykoplazma a má nejmenší dopad na buňky.Tato metoda je někdy nespolehlivá.Pokud se nejprve ošetří léky a poté se zahřeje na 41 °C, účinek bude lepší.

3. Použijte sérum specifické pro mykoplazmata

Kontaminaci mykoplazmat lze odstranit 5% králičím mykoplazmatovým imunitním sérem (hemaglutinační titr 1:320 nebo vyšší).Protože specifická protilátka může inhibovat růst mykoplazmat, stává se negativní 11 dní po léčbě antisérem a zůstává negativní o 5 měsíců později.je negativní.Tento způsob je však obtížnější a není tak pohodlný a ekonomický jako použití antibiotik.

4. Jiné metody

Kromě výše uvedených metod odstraňování kontaminace existují také metody inokulace a sterilizace u zvířat, metody fagocytózy makrofágů, metody přidávání bromouracilu do kontaminovanýchkultivační lahvea pak je ozařovat světlem a filtračními metodami atd., ale všechny jsou více problematické a neúčinné.Proto, jakmile dojde ke kontaminaci mykoplazmaty, pokud to není zvláště důležité, je obecně vyřazeno a znovu kultivováno.

kontaktujte prosím Whatsapp & Wechat: +86 180 8048 1709